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我们在进行二手荧光定量PCR仪实验时会遇到的3个参数
更新时间:2022-10-23   点击次数:737次
   二手荧光定量PCR仪是一种可以实时检测核酸扩增的技术,在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号的变化对PCR过程进行实时监控,以此实现对初始模板的定量分析。无需参比染料,无需定期校准,采用归一化算法,快速准确直观的呈现实验结果,用户使用方便简洁。我们在做荧光定量PCR时提到的三个名称:扩增曲线,标准曲线,熔解曲线。
 
  (1)扩增曲线:扩增曲线有两种展现形式,一种是线性,一种是对数形式。我们通常是用CT来推算样品中样品的浓度。CT值越高说明模板浓度越低。上面也详细说明了原理,在这里就不过多赘述。
 
  (2)标准曲线:将已知浓度的样品(标准品)经过梯度稀释后分别取样进行荧光定量PCR,得到的一系列的Ct值,用这个Ct值与Log模板数对应可以得到一个相关的曲线,我们叫标准曲线。可以用这个标准曲线中的一些参数来判断这个荧光定量PCR体系的优劣。
 
  (3)熔解曲线:Tm值,MeltingTemperature(解链温度),PCR双链产物的退火温度。这两个图是在荧光定量PCR结束后,对产物进行逐步升温时进行的监测,可以看到在达到其解链温度时,荧光信号会有一个忽然的下降。我们将测得的这个曲线叫做熔解曲线。理论上如果PCR得到特异性产物则只有一个Tm值,在溶解曲线上表示只有单峰存在。如果是多相峰,那么可以判断产物不是单一的,发生了非特异扩增。