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ABI_7500荧光定量PCR仪如何使用内标进行质量控制?
更新时间:2023-07-10   点击次数:433次
   在ABI_7500荧光定量PCR仪实验中,使用内标可以有效地进行质量控制,以下是使用内标进行质量控制的步骤:
 
  1.内标的设计和选择:设计一个特异性的内标是第一步,这个内标可以是基因组上的一个特定序列或者是一个已知的基因。这个内标的长度应该与待检测的基因组序列相当,以便于在同时进行PCR反应时,可以扩增出与待检测基因组大小相同的产物。
 
  2.内标加入的比例:标的比例应该与待检测的基因组序列相同。这可以通过在反应体系中同时加入内标和待检测的基因组序列的引物和探针来实现。
 
  3.内标的扩增:内标应该与待检测的基因组序列同时扩增。这可以通过在反应体系中同时加入内标和待检测的基因组序列的引物和探针来实现。
 
  4.内标的检测:在结束后,通过熔解曲线分析产物,可以检测内标是否正确地扩增。如果内标扩增出了正确的产物,那么说明实验的质量控制是有效的。
 
  5.内标的验证:在进行PCR实验时,需要验证内标的扩增效果。这可以通过对一系列已知浓度的内标进行PCR反应来实现。如果内标的扩增产物符合预期的熔解曲线,那么就可以确认内标是有效的。
 
  6.内标的应用:通过使用内标,可以评估荧光定量PCR实验的精密度和灵敏度。内标可以用于评估实验中的变异系数和标准差,从而确定实验的精密度。同时,通过使用内标还可以评估实验的灵敏度,因为内标的浓度可以影响实验的线性范围和检测下限。